一、消毒和滅菌的區(qū)別

1、消毒（disinfection in hospital）：殺滅或消除醫(yī)院環(huán)境中媒介物上污染的病原微生物的過程.

2、滅菌(sterilization)：殺滅或去除外環(huán)境中媒介物攜帶的一切微生物的過程.包括致病微生物和非致病微生物,也包括細(xì)菌芽胞和真菌孢子.滅菌是個絕對的概念,滅菌后物品必須是完全無菌的.即滅菌保證水平為106.

二、高溫滅菌法

高溫滅菌法是利用高溫使微生物的蛋白質(zhì)及酶發(fā)生凝固或變性而死亡，是應(yīng)用最廣泛且有效的滅菌方法。主要用于器械、容器、試劑等滅菌。

（一）高壓蒸氣滅菌法

圖為實驗室常用的高壓滅菌鍋 （右圖來自《微生物實驗》一書）

用高溫加高壓滅菌，不僅可殺死一般的細(xì)菌，對細(xì)菌芽胞也有殺滅效果，是最可靠、應(yīng)用最普遍的物理滅菌法。主要用于能耐高溫的物品，如金屬器械、玻璃、橡膠、耐高溫塑料制品及試劑的滅菌。高壓蒸氣滅菌器的類型和樣式較多，如：①下排氣式壓力蒸氣滅菌器是普遍應(yīng)用的滅菌設(shè)備，壓力升至102.9kPa，溫度達(dá)121～126℃，維持20～30分鐘，可達(dá)到滅菌目的。②脈動真空壓力蒸氣滅菌器已成為目前最先進(jìn)的滅菌設(shè)備。滅菌條件要求：蒸氣壓力205.8kPa，溫度達(dá)132℃以上并維持10分鐘，即可殺死包括具有頑強(qiáng)抵抗力的細(xì)菌芽胞在內(nèi)的一切微生物。

濕熱滅菌是目前實驗室使用最為廣泛，滅菌效果最佳的方法。目前濕熱滅菌的儀器技術(shù)上也非常成熟，安全系數(shù)較高。

高壓蒸氣滅菌的注意事項：

包裹的物品不宜太大，一般應(yīng)小于30cm×30cm×50cm，大于該尺寸需要酌情延長滅菌時間；

1.高壓鍋內(nèi)的包裹不要排得太密，以免妨礙蒸氣透入，影響滅菌效果；

2.對塑料制品不宜放置過于擁擠，以免發(fā)生形變；

3.壓力、溫度和時間達(dá)到要求時，指示帶上和化學(xué)指示劑即應(yīng)出現(xiàn)已滅菌的色澤或狀態(tài)；

4.銳性器械，如刀、剪不宜用此法滅菌，以免變鈍；

5.瓶裝液體滅菌時，如有塑料瓶蓋要適當(dāng)旋松瓶蓋，并用牛皮紙或紗布包扎瓶口；如有橡皮塞時，應(yīng)插入針頭排氣，切記要保持瓶內(nèi)外的連通，防止高溫膨脹爆裂；

6.注明滅菌日期和物品保存時限，一般可保留1～2周；

7.應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，每次滅菌前，應(yīng)檢查安全閥的性能，以防壓力過高發(fā)生爆炸，保證安全使用。

（二）干熱滅菌法

滅菌條件為：160℃維持2小時；170℃維持1小時；180℃維持30分鐘；高溫下可達(dá)滅菌要求。適用于易被濕熱損壞和在干燥條件下使用更方便的物品（如金屬、玻璃、陶瓷及凡士林紗布條等）滅菌。由于其對烤箱要嚴(yán)格要求（國內(nèi)產(chǎn)的烘箱質(zhì)量都有點(diǎn)懸），且大功率、高溫下危險系數(shù)較大，一般不建議使用！特殊情況下，如需要滅活器械、容器中對于溫度超級穩(wěn)定的RNase時，才考慮使用（其實也可以DEPC預(yù)處理器械、容器、溶劑等，然后濕熱滅菌！）。

干熱滅菌法的注意事項：

1.對滅菌對象的理化性質(zhì)有一定了解，明確對象在高溫下的穩(wěn)定性；

2.對設(shè)備的情況、參數(shù)有清醒認(rèn)識，了解設(shè)備的溫度設(shè)計上限；

3.專項供電，確保接入電路足夠負(fù)荷；

4.滅菌過程中，相關(guān)人員要實時在崗監(jiān)管，不得離崗，如遇特發(fā)情況及時切斷電源！

三、過濾除菌法

過濾除菌法（Sterilization byfiltration） 是用物理阻留的方法將液體或空氣的細(xì)菌除去，以達(dá)到無菌目的。常用于對熱不穩(wěn)定液體試劑的滅菌。一般來說孔徑為0.22μm的微濾膜即可有效地去除微生物達(dá)到除菌的目的，但該孔徑下無法去除體積極小的支原體或病毒顆粒。因此如果需要去除這些物體，就需要使用孔徑更小的納濾膜(孔徑可達(dá)20 -50nm )。

由于濾膜孔徑的大小和過濾的流速呈反比，因此我們通常在小孔徑濾膜之前使用大孔徑的濾膜進(jìn)行預(yù)過濾，從而防止微孔被過早的堵塞，保證過濾通暢進(jìn)行，進(jìn)而獲得更高的得率。

在過濾除菌過程中要求過濾裝置和濾膜自身必須無菌。因此我們可以選擇購買已經(jīng)無菌預(yù)處理的一次性使用裝置（如Millipore的一次性針頭濾器），也可以選擇自行無菌處理，目前市售的濾膜通?？梢圆捎酶邏簻缇ǔ?/span>

注意事項：

在正式過濾前，必須進(jìn)行過濾系統(tǒng)的密閉性和濾膜的完整性測試。過濾過程要在等級A的潔凈室內(nèi)進(jìn)行（通?？稍诔瑑襞_完成）。

四、紫外線滅菌

紫外線的定義是波長在10納米到400納米之間的電磁輻射。不過在實際應(yīng)用中，使用的波長一般在100納米以上。波長在315到409納米之間的UVA通?？梢园哑つw曬黑，波長280到315納米的UVB可以灼傷皮膚并增加皮膚癌風(fēng)險，波長在200到280納米的UVC可以有效地殺滅細(xì)菌和病毒，而波長在100到200納米之間的紫外線會被空氣中的氧氣吸收，所以只能在真空中或者至少是完全無氧的環(huán)境里工作，也就不適合用于現(xiàn)實殺菌了。傳統(tǒng)的紫外殺菌選用254納米的波長。

從左到右分別是X-射線、紫外光?？梢姽?、紅外光，光的波長依次遞增。常用的殺菌波長254納米位于紫外光中遠(yuǎn)紫外線（UVC）波段。圖片來源：tecnowattsnc.it

當(dāng)紫外線被細(xì)菌或者病毒吸收之后，就會破壞DNA，從而使它們失去增殖能力。就殺菌結(jié)果而言，跟加熱或者用化學(xué)物質(zhì)處理是一樣的。

紫外殺菌的能力除了跟波長有關(guān)，還取決于滅菌物被輻射到的能量。在選定的254納米波長下，殺菌效果跟能量強(qiáng)度呈現(xiàn)一個拉伸過的S型。也就是說，在低能量下，殺菌效果很差，這是因為細(xì)菌或者病毒跟人體一樣，對于DNA損傷有一定的修復(fù)能力。在照射能量低的時候，損傷的DNA被及時修復(fù)，細(xì)菌和病毒就能夠繼續(xù)增殖下去。當(dāng)能量高到一定程度，DNA修復(fù)系統(tǒng)實在忙不過來了，DNA損傷急劇增加，宏觀上表現(xiàn)出來就是細(xì)菌或病毒被“殺死”了。超過這個能量強(qiáng)度，每增加一點(diǎn)，滅菌能力都會大大增加。但是增加到一定程度，就進(jìn)入第二個平臺——再繼續(xù)增高能量，殺菌效果增加得也很少。這個滅菌效果上的“尾巴”可能是源于一部分微生物對于紫外線攻擊很頑強(qiáng)，也可能源于有一部分被處理樣品無法被照射到。

因為這個“尾巴”的存在，紫外殺菌難以實現(xiàn)加熱或者化學(xué)殺菌劑那么徹底的殺滅。通常把降低4個對數(shù)值作為“滅菌標(biāo)準(zhǔn)”，也就是還有萬分之一的細(xì)菌活下來。而鮮牛奶的巴氏殺菌——在72攝氏度下處理15秒——則通常是降低5個對數(shù)值，即最多只有十萬分之一的細(xì)菌存活。如果降低的對數(shù)值是12個以上，幾乎就沒有細(xì)菌能夠幸存了。

不同的微生物對紫外線的敏感性不同，有的在較低能量強(qiáng)度下就會被大量殺滅，而有的則需要更高能量才行。以降低4個對數(shù)值為標(biāo)準(zhǔn)，研究中檢測過的細(xì)菌有的只需要每平方米幾十焦耳的能量，有的則需要每平方米300焦耳以上。我們并不知道現(xiàn)實的食物中存在哪些細(xì)菌，又各有多少，所以總是把最頑強(qiáng)的那個作為目標(biāo)，順便把其他的滅了。因此，紫外殺菌所用的能量強(qiáng)度需要在每平方米400焦耳以上。

各種滅菌技術(shù)的滅菌效果都會受到滅菌物理化性質(zhì)的影響。比如加熱或者高壓滅菌，溫度、酸堿度和壓力都會有很大影響。而在紫外滅菌中，這些因素就不那么重要。紫外殺菌的關(guān)鍵是紫外線能夠達(dá)到細(xì)菌，所以穿透性是關(guān)鍵。諸如滅菌物的組成、固體含量、顏色等因素都會影響紫外線的吸收，從而影響它穿透的厚度，也就對殺菌效果有很大的影響。如果滅菌物均一、透明，紫外線的穿透性好，滅菌效果就會好；反之，如果滅菌物渾濁，那么紫外線就會被散射，能量在穿透中降低，滅菌效果就會比較差。

總的來說，紫外線的穿透能力比較差，通常也就能穿透兩三厘米的厚度。但如果用在某些物質(zhì)短時間滅菌，效果還是很好的。

注意事項：

1.選擇紫外燈時，應(yīng)該仔細(xì)核對型號、適用范圍和注意事項。不要進(jìn)入開啟紫外消毒燈的室內(nèi)。千萬不要對著消毒燈驗鈔或者觀察熒光，任何時候都不應(yīng)該直視紫外燈管。紫外燈應(yīng)該盡可能只在封閉空間內(nèi)小范圍使用，并避免不必要的暴露

2.在使用過程中，應(yīng)保持紫外線燈表面的清潔，一般每兩周用酒精棉球擦拭一次，發(fā)現(xiàn)燈管表面有灰塵、油污時，應(yīng)隨時擦拭。

3.用紫外線消毒物品表面時，應(yīng)使照射表面受到紫外線的直接照射，且應(yīng)達(dá)到足夠的照射劑量

五、化學(xué)消毒滅菌

（1）浸泡法 選用殺菌譜廣、腐蝕性弱、水溶性消毒劑，將物品浸沒于消毒劑內(nèi)，在標(biāo)準(zhǔn)的濃度和時間內(nèi)，達(dá)到消毒滅菌目的。

（2）擦拭法 選用易溶于水、穿透性強(qiáng)的消毒劑，擦拭物品表面，在標(biāo)準(zhǔn)的濃度和時間里達(dá)到消毒滅菌目的。

（3）薰蒸法 加熱或加入氧化劑，使消毒劑呈氣體，在標(biāo)準(zhǔn)的濃度和時間里達(dá)到消毒滅菌目的。

適用于室內(nèi)物品及空氣消毒或精密貴重儀器和不能蒸、煮、浸泡的物品（血壓計、聽診器以及傳染病人用過的票證等），均可用此法消毒。

（4）噴霧法 借助普通噴霧器或氣溶膠噴霧器，使消毒劑產(chǎn)生微粒氣霧彌散在空間，進(jìn)行空氣和物品表面的消毒。

（5）環(huán)氧乙烷氣體密閉消毒法 將環(huán)氧乙烷氣體置于密閉容器內(nèi)，在標(biāo)準(zhǔn)的濃度、濕度和時間內(nèi)達(dá)到消毒滅菌目的。

環(huán)氧乙烷是廣譜氣體殺菌劑，能殺滅細(xì)菌繁殖體及芽胞，以及真菌和病毒等。穿透力強(qiáng)，對大多數(shù)物品無損害，消毒后可迅速揮發(fā)，特別適用于不耐高熱和溫?zé)岬奈锲?#xff0c;如精密器械、電子儀器、光學(xué)儀器、心肺機(jī)、起博器、書籍文件等，均無損害和腐蝕等副作用。本品沸點(diǎn)為10.8℃，只能灌裝于耐壓金屬罐或特制安瓿瓶中。

注意事項

1.易燃易爆品存放在陰涼、通風(fēng)、無火源、無電開關(guān)處。用時輕取輕放，勿猛烈碰撞。2.消毒時，應(yīng)注意環(huán)境的相對濕度和溫度。鋼瓶需加溫時，熱水不可超過70℃。

3.對皮膚、眼及粘膜刺激性強(qiáng)的液體，如有接觸，立即用水沖洗。

4.在有毒氣體消毒的操作過程中，如有頭昏頭痛等中毒癥狀時，應(yīng)立即離開現(xiàn)場，至通風(fēng)良好處休息。

六、火焰滅菌

是指用火焰直接燒灼的滅菌方法。該方法滅菌迅速、可靠、簡便，適合于耐火焰材料（如金屬、玻璃及瓷器等）物品與用具的滅菌，不適合藥品的滅菌。

最常見的火焰滅菌，酒精燈。

圖為加熱接種環(huán)。（圖片來源：《接種、分離純化和培養(yǎng)技術(shù)》）

注意事項：

1、酒精燈的燈芯要平整. 　　

2、添加酒精時,不超過酒精燈容積的2/3；酒精不少于1/4. 　　

3、絕對禁止向燃著的酒精燈里添加酒精,以免失火. 　　

4、絕對禁止用酒精燈引燃另一只酒精燈. 　　

5、用完酒精燈,必須用燈帽蓋滅,不可用嘴去吹. 　　

6、不要碰倒酒精燈,萬一灑出的酒精在桌上燃燒起來,應(yīng)立即用濕布撲蓋.

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